HSV1-TK/GCV系统作为肿瘤疫苗"死亡开关"的研究

Herpes Simplex Virus Type 1 Thymidine Kinase/Ganciclovir (HSV1-TK/GCV) System As an Effective "In Vivo Death Switch" of Live Tumor Vaccines

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摘要背景与目的:肿瘤活疫苗有高效的抗肿瘤免疫能力,但其体内增殖性限制了进一步的临床应用.本研究将Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶/丙氧鸟苷(HSV1-TK/GCV)系统作为肿瘤活疫苗的"死亡开关",以期控制疫苗在体内的存活状态,并探讨其作用机制.方法:以逆转录病毒为载体将HSV1-TK基因转导入大鼠卵巢癌细胞株NuTu-19,经G418筛选出阳性克隆后与Fischer344大鼠骨髓来源的树突细胞融合,制成携带有HSV1-TK基因的卵巢癌DC活疫苗(FC/TK).以RT-PCR和Western blot检测FC/TK细胞中的HSV1-TK表达.体外以XTT法检测不同浓度GCV对FC/TK的体外杀伤作用;以流式细胞仪和Hoechst染色法检测GCV作用5天后FC/TK的凋亡现象.体内实验中,取大鼠经足垫皮下接种FC/TK后分为两组:FC/TK+GCV组大鼠再予GCV腹腔注射7天;FC/TK+生理盐水组作为对照组.接种FC/TK后观察90天,记录注射部位有无肿瘤形成及各脏器的肿瘤转移情况.结果:FC/TK中有HSV1-TK的表达,在体外GCV对FC/TK的杀伤率可达86.25%,其中大于80%的FC/TK发生凋亡,并出现细胞核浓缩、边集等凋亡现象.FC/TK+生理盐水组共有3只(60%)的大鼠注射部位出现低分化腺癌;而FC/TK+GCV组未见局部肿瘤形成及脏器转移.结论:HSV1-TK/GCV通过诱导肿瘤活疫苗发生凋亡而起到控制其存活状态的作用.