马克斯克鲁维酵母外切菊粉酶INU1的晶体结构研究
The Crystal Structure Study of Exoinulinase INU1 from Kluyverom yces marxianus
摘要菊粉酶是一类能够将菊粉水解成果糖和低聚果糖的酶,它广泛应用于糖浆和果糖的工业生产.为了深入研究菊粉酶的结构与功能特征,我们解析了马克斯克鲁维酵母ATCC12424的外切菊粉酶INU1的晶体结构.通过毕赤酵母SMD1168 (his4,pep4)对INU1进行了分泌表达,其体积酶活达到了1 671 U/mL.使用阴离子交换柱对INU1进行纯化并结晶解析了结构,INU1的晶体属于空间群14122,晶胞参数a=b=c=172.65 (A),在上海同步辐射光源其衍射分辨率为2.8 (A),一个非对称单位中有两个INU1分子以面对面方式堆积成二聚体.INU1的晶体结构与GH32(糖苷水解酶32)家族其他蛋白一致,主要由N端保守的5个β螺旋桨结构域和C端不保守的β夹层结构域组成.氨基酸序列和晶体结构对比显示,INU1的催化位点为Asp53,Asp182和Glu238.这个晶体结构为菊粉酶INU1的进一步改造以适应工业化生产提供了基础.
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