O 型口蹄疫病毒 VP1蛋白竞争 ELISA 诊断方法的初步建立
Establishment of Competitive ELISA Diagnostic Method for Foot-and-mouth Disease Based on VP1 Protein in Serotype OVirus
摘要利用表达的重组融合蛋白 pGEX-6P-1-VP1作为抗原,用 PET-32a-VP1蛋白免疫家兔获得的阳性血清作为 FMDV 阳性血清的竞争抗体,建立了检测 FMDV 抗体的竞争 ELISA,并进行了条件优化,利用统计学方法计算竞争 ELISA 的阳性临界值。结果显示,重组蛋白抗原的最适包被质量浓度为1μg·mL-1,待检血清、酶标抗体和高免血清的最佳稀释度分别为1∶40、1∶2000和1∶500;与液相阻断 ELISA 试剂盒相比较,该方法的敏感性为91.3%,特异性为95.1%,符合率为96.7%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、重复性好,可用于 O 型 FMDV 血清抗体水平的检测。
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