换一批龙眼DlAGO4和DlAGO6启动子的克隆及活性分析
Cloning and Activity of DlAGO4 and DlAGO6 Promoters from Dimocarpus longan
摘要[目的]Argonaute(AGO)蛋白是RNA介导的沉默复合物RISC的核心成分,参与植物生长发育、组织形成、细胞增殖凋亡、病毒防御、逆境响应等多种生物过程.探究龙眼DlAGO4和DlAGO6基因启动子区域的顺式作用元件,以及重组表达载体在不同激素处理下的表达模式,可为进一步研究DlAGO4和DlAGO6基因的功能提供参考.[方法]使用常规PCR技术克隆龙眼DlAGO4和DlAGO6基因启动子序列,采用BPDG、PLACE和PlantCARE等生物信息学工具进行DlAGO4和DlAGO6基因启动子序列的生物信息学分析,并构建全长启动子与GUS基因融合表达载体,转化烟草叶片,进行瞬时表达,通过GUS组织化学染色分析启动子的活性.[结果]DlAGO4基因启动子片段长度 1514 bp,DlAGO6基因启动子片段长度 1784 bp.两个启动子序列均含有TATA-box和CAAT-box核心元件、茉莉酸甲酯、脱落酸和光响应元件;DlAGO4启动子序列还含有水杨酸、赤霉素响应元件和厌氧应答调控元件;DlAGO6启动子序列还含有生长素及昼夜节律调控元件.2个启动子片段均可驱动GUS基因表达,表达强度弱于 CaMV35S.MeJA和 ABA处理可显著提高转 DlAGO6启动子烟草叶片中 GUS基因的相对表达水平,SA和MeJA处理可提高转DlAGO4启动子烟草叶片GUS基因的相对表达水平.[结论]成功克隆了龙眼DlAGO4和DlAGO6基因启动子,二者为激素诱导型启动子,具有驱动下游GUS表达的活性,可能参与了植物体胚发育以及对激素的响应.
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