换一批适于cDNA-AFLP的黑木相思组培苗总RNA快速提取方法的建立
A Fast Method Suited to Extract Total RNA Used to cDNA-AFLP from Plantlets of Acacia melanoxylon Cultured in Vitro
摘要针对黑木相思富含多酚、多糖等次生代谢物质的特点,以其组培苗为试材,采用改良CTAB裂解法、硼砂-SDS裂解法、改良异硫氰酸胍裂解法、CTAB-异硫氰酸胍裂解法、改良CTAB-异硫氰酸胍裂解法等5种不同的提取方法提取其总RNA.结果发现:改良CTAB-异硫氰酸胍裂解法能有效地控制多酚、多糖、蛋白质以及DNA等对所提取总RNA的污染,所得总RNA质量高、完整性好.紫外分光光度检测,A_(260)/A_(280)比值为1.96～2.00,A_(260)/A_(230)比值1.98～2.20,总RNA得率为118.4～213.6 μg·g~(-1),电泳检测,28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,所提RNA质量可以满足dscDNA合成和cDNA-AFLP等后续分子操作要求.
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