换一批circGLIS3通过miR-181 a-5 p/DDX3 X轴调控骨髓间充质干细胞成骨分化的作用机制
Mechanism of Action of circGLIS3 in Regulating Osteogenic Differentiation of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Through miR-181 a-5 p/DDX3 X Axis
摘要目的 探讨环状RNA GLIS3(circGLIS3)通过miR-181a-5p/DEAD-box RNA解旋酶3X连锁(DDX3X)轴调控骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用机制.方法 qRT-PCR检测骨质疏松症(OP)骨折患者(OP组)、无OP症状的外伤性骨折患者(无OP组)骨组织circGLIS3、miR-181a-5p及DDX3X mRNA表达,同时检测诱导成骨分化0、7、14 d的BMSCs中circGLIS3、miR-181a-5p及DDX3X mRNA表达.人BMSCs分为对照组(control组)、下调对照组(si-NC组)、circGLIS3下调组(si-circGLIS3组)、上调对照组(miR-NC组)、miR-181a-5p 上调组(miR-181a-5p 组)、circGLIS3 下调+inhibitor NC 组(si-circGLIS3+inhibitor NC 组)、circG-LIS3 下调+miR-181 a-5p inhibitor 组(si-circGLLS3+miR-181a-5p inhibitor 组).qRT-PCR 检测 BMSCs 中 circG-LIS3、miR-181a-5p及DDX3X mRNA表达;CCK-8检测BMSCs增殖;茜素红染色检测BMSCs中钙沉积水平;碱性磷酸酶(ALP)比色测定试剂盒检测BMSCs中ALP活性;Western-blot检测BMSCs中DDX3X、骨钙素(OCN)、Runt 相关转录因子 2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)蛋白;验证 circGLIS3 与 miR-181a-5p、miR-181a-5p 与 DDX3X 的关系.结果 与无OP组比较,OP组患者骨组织中circGLIS3及DDX3XmRNA表达升高,miR-181a-5p表达降低(P＜0.05).与未分化的BMSCs比较,已分化BMSCs(7 d、14 d)的circGLIS3 及 DDX3X mRNA表达降低,miR-181a-5p 表达升高(P＜0.05).与 si-NC 组、control 组比较,si-circGLIS3 组的 circGLIS3 及 DDX3X mRNA表达、DDX3X蛋白降低,miR-181 a-5p表达、D450nm、钙沉积水平、ALP活性及OCN、Runx2、OPN蛋白升高(P＜0.05);与miR-NC组、control组比较,miR-181a-5p组的circGLIS3变化无统计学意义(P＞0.05),其他指标变化趋势与上述一致(P＜0.05);miR-181a-5p inhibitor逆转了下调circGLIS3对BMSCs成骨分化的促进作用;circG-LIS3靶向调控miR-181a-5p/DDX3X轴.结论 下调circGLIS3可能通过调控miR-181a-5p/DDX3X轴促进BMSCs成骨分化.
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