换一批
换一批异源性Th表位修饰的CTLA4-Ig-msBlys构建及融合蛋白表达
Construction and expression of a recombinant expression protein of CTLA4-Ig-msBlys which modified by Th epitope
摘要目的 构建异源性Th表位修饰的CTLA4-Ig-msBlys的原核表达质粒,并在E.coli BL21中诱导融合蛋白表达,初步检测蛋白特性.方法 采用PCR法从质粒pCMV-sBlys扩增sBlys片段,将与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th 表位重组后的msBlys连接CTLA4-Ig片段,克隆人pGEX-KG原核表达载体,用LB固体培养基抗生素筛选、酶切并经琼脂糖凝胶电泳鉴定;将质粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys转入E.coli BL21菌株中,实现插人基因的融合表达,用SDS-PAGE 和Western blot检测表达产物.结果 pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys构建正确且最终转人E.coli BL21,得到融合蛋白的表达;CTLA4-Ig-msBlys融合蛋白在E.coli中获得表达,表达产物的相对分子质量同预期值一致.结论成功构建原核表达质粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys,并在E.coli BL21表达CTLA4-Ig-msBlys融合蛋白,为下一步探讨Blys在自身免疫性疾病患者的治疗作用莫定了基础.
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栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1002-2600.2011.02.004
发布时间
2011-07-18
基金项目
福建省自然科学基金
福建省卫生厅青年科研课题
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