X射线离体照射人外周血淋巴细胞差异表达基因的筛选与初步验证
Screening and preliminary verification of differentially expressed genes in ex vivo X-irradiated human peripheral blood lymphocytes
摘要筛选外周血淋巴细胞中的辐射应答差异表达基因(differrentially expression gene,DEGs)并验证其剂量-效应和时间-效应关系,探讨DEGs作为辐射生物剂量计的可行性.取3名成年志愿者的外周血淋巴细胞样本进行0.1、0.2、0.5、1、2和4 Gy X射线照射,对细胞进行RNA测序及生物信息学分析.以log2|Fold Change|≥2、P<0.05为条件筛选DEGs并进行聚类热图分析、基因本体论(GO)功能注释分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证DEGs中EDA2R、ACER2、CD70、ACTA2、MGAT3、MAMDC4的剂量-响应或时间-效应关系.照射后8 h在不同剂量(0.1、0.2、0.5、1、2和4 Gy)水平上筛选出37个DEGs,GO分析表明DEGs基因在细胞过程、单个生物体过程、生物调节、对刺激应答的调控中最为丰富,而KEGG分析表明DEGs主要在细胞生长和死亡过程中富集.qRT-PCR实验结果表明EDA2R、ACER2、CD70、ACTA2在照射后8 h以剂量依赖的方式显著上调.2 Gy X射线照射淋巴细胞中ACTA2的表达随时间增加而增加,表现出时间-效应关系.人外周血淋巴细胞样本中EDA2R、ACER2、CD70、ACTA2呈剂量依赖性上调,其中ACTA2呈时间依赖性上调,这些基因具有成为人类辐射生物剂量计的潜能.
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