基于核酸外切酶-Ⅲ和金片基底捕获循环策略用于锰超氧化物岐化酶DNA的检测

Exonuclease Ⅲ and Gold Substrate Capturing Cyclic Strategy for Detection of Manganese Superoxide Dismutase DNA

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摘要利用核酸外切酶Ⅲ辅助信号放大技术和金片基底捕获循环策略,设计了一种灵敏且简单的锰超氧化物岐化酶基因序列(MnSOD DNA)检测方法.首先设计合成了标记荧光基团的发夹探针,在MnSOD DNA存在下,探针发夹结构被打开,然后在核酸外切酶Ⅲ的作用下,发夹探针部分被水解,释放出MnSOD DNA和标记荧光基团的残余发夹探针片段,MnSOD DNA可继续与剩余的完整发夹探针杂交,进入下一个循环.因此,反应一定时间后,反应液中含有大量的带有标记荧光基团的残余发夹探针片段,可与金片基底上修饰的捕获探针杂交而被捕获,通过检测其荧光,可实现对MnSOD DNA的定量分析,方法检出限为0.42 pmol/L.将本方法用于检测Hela、Jurkat和Ramos细胞裂解液中的MnSOD DNA,加标回收率在90.2％～111.2％之间.本方法可有效消除背景干扰和基质效应的影响,有望成为一种通用的短链DNA的检测方法.