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聚乙二醇沉淀富集和预扩增反转录实时定量聚合酶链式反应高灵敏检测小浆果中低浓度甲型肝炎病毒

Highly Sensitive Detection of Low Concentration Hepatitis A Virus in Small Berries Using Polyethylene Glycol Precipitation Enrichment and Pre-Amplification Reverse Transcription-Quantitative Polymerase Chain Reaction

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摘要基于聚乙二醇沉淀富集和改进的预扩增反转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR),建立了高灵敏检测小浆果中低剂量感染甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)的方法.优化了聚乙二醇沉淀富集草莓中HAV的处理时间,探索设置预扩增步骤以加速样本核酸裂解和富集模板,建立了一种高灵敏的预扩增RT-qPCR检测新方法.回收率为15.51％,HAV减毒疫苗检测灵敏度可低至滴度4.49 CCID50/mL,检测HAV质粒的灵敏度低至3.5 copies/μL.与ISO/TS15216-2:2019标准方法相比,本方法具有更高的检测效率,适于对小浆果中微量污染HAV的检测.对78批市售小浆果样品中HAV的阳性检出率为5.13％,高于采用ISO/TS 15216-2:2019标准方法的检出率(1.28％).本方法对低剂量HAV病毒污染小浆果的检测具有很好的适用性和推广应用前景.

作者王娉 ^[1] 田卓 ^[2] 齐欣 ^[3] 郑秋月 ^[4] 胡冰 ^[4] 麻丽丹 ^[5] 杨莉莉 ^[4] 陈颖 ^[1] 曹际娟 ^[4] 学术成果认领

作者单位中国检验检疫科学研究院,北京322001 ^[1] 大连民族大学生命科学学院,生物技术与资源利用教育部重点实验室,大连116600;大连海关技术中心,大连116001;辽宁师范大学生命科学学院,大连116023 ^[2] 大连海关技术中心,大连116001 ^[3] 大连民族大学生命科学学院,生物技术与资源利用教育部重点实验室,大连116600 ^[4] 丹东海关综合技术服务中心,丹东118017 ^[5]

关键词小浆果低剂量甲型肝炎病毒聚乙二醇预扩增实时定量聚合酶链式反应检测

栏目名称

研究报告

DOI 10.19756/j.issn.0253-3820.210775

发布时间 2022-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

国家重大研发计划项目（No.2018YFC1603504）；辽宁省兴辽英才计划项目（No.XLYC2002106）