急性淋巴细胞白血病患儿红细胞中硫嘌呤甲基转移酶活性的HPLC分析

Determination of thiopurine S-methyltransferase activity in the red blood cell of acute lymphoblastic leukaemia children by a non-extraction liquid chromatographic method

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摘要建立了急性淋巴细胞白血病患儿血液中红细胞中的硫嘌呤甲基转移酶活性(TPMT)的HPLC测定法. 采用反相高效液相色谱法直接测定酶促反应的产物浓度,从而计算红细胞中TPMT的活性. 以S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)作为甲基供给体,6-硫鸟嘌呤(6-TG)作为酶反应底物,TPMT催化6-TG生成2-氨基-6-甲基巯基嘌呤(6-MTG),采用HClO4溶液终止反应及沉淀蛋白,分离上清液进行色谱分析. 色谱柱为AichromBond-1 C18柱(5 μm,4.6 mm i.d.×150 mm);等梯度洗脱,流动相为V(乙腈)∶V(0.01 mol/L 磷酸钾缓冲溶液)＝6∶94 (用HCl调pH 2.74),荧光检测器检测,激发波长为310 nm,发射波长为390 nm. 结果表明,6-MTG在0～250 μg/mL范围内呈良好的线性关系,相关系数r=0.9999,检出限为0.093 μg/L (S/N=3),回收率为81.4%～106.3%. 方法能用地巯基嘌呤类药物药代研究和临床用药监测常规分析.