换一批DNA实验室人源性DNA污染TaqMan qPCR检测方法的建立及应用
Establishment and Application of TaqMan qPCR Detection Method for Human DNA Contamination in DNA Laboratory
摘要目的 基于实时定量PCR(real time quantitative PCR,qPCR)技术,建立一种灵敏度高、特异性好的人源性DNA检测方法,以实现对DNA实验室中潜在DNA污染源的快速检测.方法 以人18S rRNA基因的参考序列为模板,用Primer ExpressTM设计引物和探针,用矩阵法筛选最优引物-探针组合.用人18S rRNA基因靶标序列的PCR扩增产物构建质粒,并用质粒标准品绘制qPCR体系的标准曲线.参照《实时定量PCR实验发表的最少信息要求指南》(the MIQE guidelines)要求,评估qPCR体系的特异性、灵敏度、重复性及应用效果.结果 建立的qPCR体系的分析灵敏度为5.3×10-5 ng/μL,对人源性DNA样本具有较好的特异性.qPCR体系的相关系数为-0.999,扩增效率为100%,批次内和批次间变异系数均小于2%.结论 建立的人源性DNA qPCR检测方法的特异性好、灵敏度高、稳定性好,可用于DNA实验室污染的快速检测和实验室环境中累积的人源性DNA的日常监控.
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关键词
法医遗传学DNA污染实验室实时定量PCR(qPCR)TaqMan探针法医DNA分析forensic geneticsDNA contaminationlaboratoryreal time quantitative PCR(qPCR)TaqMan probeforensic DNA analysis
栏目名称
DOI
10.12116/j.issn.1004-5619.2023.531004
发布时间
2025-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省社会发展科技协同创新体系建设项目（2024A1111120006）
扬州市科技计划资助项目（YZ2023127）
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