换一批EGFR siRNA序列的筛选及其对HepG2细胞活性的影响
Analysis of the interference efficiency of EGFR siRNA and its effect on the proliferation of hepatoma cells
摘要目的 构建EGFR shRNA重组真核表达载体,并筛选抑制效果最好的EGFR shRNA序列.方法 应用在线工具设计人EGFR siRNA序列,采用限制性内切酶BamHI和HindIII切割真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建三种人EGFR的siRNA干扰序列载体(psilencer 4.1-CMV neo-EGFR siRNA).将重组质粒载体转化大肠杆菌DH5α感受态并筛选阳性克隆,通过DNA测序鉴定重组质粒.应用脂质体lipo2000将三种人EGFRsiRNA干扰序列载体转染到HepG2细胞,通过荧光显微镜观察转染效率,实时定量PCR检测EGFR mRNA表达水平,MTT法检测细胞活性.结果 Psilencer 4.1-CMV neo-EGFR siRNA重组质粒被成功克隆.EGFR shRNA-1、EGFR shRNA-2和EGFR shRNA-3敲低EGFR mRNA的效率分别是80%、60%和70%以上.shRNA-2和shRNA-3使细胞活性分别下降50%(P<0.05),但shRNA-1对细胞活性无明显影响(P>0.05).结论 重组psilencer 4.1-CMV neo-EGFR siRNA质粒可下调肝癌细胞株EGFR表达水平和细胞活性.EGFRshRNA-3较EGFRshRNA-1和shRNA-2对HepG2细胞的抑制作用更显著.
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DOI
10.3969/j.issn.1674-6929.2024.05.035
发布时间
2024-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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