换一批稳定分泌表达猪瘟病毒保护性抗原E2蛋白的HEK-293T细胞系的构建及鉴定
Construction and identification of HEK-293T cell line stably secreting and expressing E2 protein,a protective antigen of classical swine fever virus
摘要目的 构建一种高效、稳定表达分泌型猪瘟病毒E2 蛋白的HEK-293T细胞株.方法 利用分子克隆技术将含有信号肽的猪瘟病毒E2 基因插入到慢病毒表达质粒,获得重组慢病毒载体pLV-CMV-E2.通过三质粒转染法包装重组慢病毒并感染HEK-293T细胞,采用有限稀释法获得稳定表达分泌性E2 蛋白的重组单克隆细胞系.结果 重组质粒酶切及PCR鉴定结果可见约 1 050 条带,与CSFV E2基因大小相符;包装慢病毒LV-CSFV E2检测滴度为1×108 copies/mL.慢病毒感染HEK-293T后,经Dot blot 和有限稀释法筛选得到 7 个细胞形态均一、长势良好且E2 蛋白表达水平较高的克隆(A4,A5,C1,D1,D2,E1,E2);重组细胞系经PCR及Western blot方法检测到E2基因及蛋白所对应特异性条带.将重组细胞系连续传至70代,E2蛋白表达水平稳定不变;免疫学实验结果显示,重组E2蛋白能够与猪瘟阳性血清发生特异性反应.结论 本研究成功建立了一种稳定高效地表达分泌性重组E2蛋白的真核表达系统,为研究猪瘟E2亚单位疫苗及血清学诊断方法等奠定基础.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1674-6929.2025.03.016
发布时间
2025-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省基础与应用基础研究基金（2022A1515110673）
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