换一批
换一批湿加松MSAP反应体系建立及引物筛选
Establishment of MSAP Reaction Systems for Pinus elliottii×P.caribaea and Primers Screening
摘要为开展湿加松(Pinus elliottii×P.caribaea)甲基化研究,以湿加松幼嫩针叶为材料,建立了湿加松MSAP(甲基化敏感扩增多态性)反应体系,其中:酶切-连接体系为:400 ng基因组DNA用EcoRⅠ+HapⅡ或EcoR Ⅰ+MspⅠ各3U进行双酶切,37℃保温24 h,用T4 DNA ligase 16℃连接过夜.最佳预扩增体系为:酶切-连接产物1 μL、上下游引物各1μL、2×PCR mastermix 10 μL和ddH2O27μL.20 μL选择性扩增体系中,含有10倍稀释的模板DNA 2 μL、上下游引物各1灶、2×PCR mastermix10 μL和ddH2O26 μL.利用反应体系,筛选出了13对适宜于湿加松MSAP分析的引物,建立的MSAP反应体系可用于湿加松基因组DNA甲基化差异分析.
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分类号
S791.24
栏目名称
试验研究
DOI
10.3969/j.issn.1006-4427.2015.03.008
发布时间
2015-10-29
基金项目
林木遗传育种国家重点实验室(中国林业科学研究院)开放课题“湿加松及其亲本DNA甲基化水平与杂种优势关系研究”
广东省科技创新专项“湿加松优良新品系评价与选育技术研究”
国家林业局林业公益性行业科研专项“国外松高世代良种培育关键技术研究”
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