内质网应激头颈部鳞状细胞癌细胞通过外泌体miR-26a-5p调控PTEN/AKT通路促进巨噬细胞PD-L1表达

Endoplasmic reticulum stressed HNSCC cell-derived exosomal miR-26a-5p promotes PD-L1 expression in mac-rophage through PTEN/AKT signaling pathway

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摘要目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的头颈部鳞状细胞癌(head and neck squa-mous cell carcinoma,HNSCC)细胞分泌的外泌体miRNA表达变化对巨噬细胞的影响机制.方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准.通过蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)和实时荧光定量PCR实验(RT-qPCR)检测HNSCC肿瘤组织及癌旁组织ERS相关蛋白,包括蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplas-mic reticulum kinase,PERK)和葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)的表达水平;以500 U/mL干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)处理人喉鳞癌细胞系HN4细胞48 h,诱发HN4细胞产生内质网应激反应,收集HN4细胞分泌的外泌体,通过生物信息学分析鉴定外泌体的miRNA种类,预测miRNA的靶基因,将巨噬细胞转染miRNA、与收集的外泌体共培养、并敲低巨噬细胞PTEN表达,以WB和RT-qPCR检测外泌体miRNA调控的下游信号通路蛋白酪氨酸磷酸酶(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)及程序性死亡受体-1 配体(programmed death receptor ligand 1,PD-L1)表达变化.结果 HNSCC肿瘤组织相比癌旁组织ERS相关蛋白表达水平升高(P＜0.05);RNA测序及实验验证表明ERS的HN4细胞分泌的外泌体miR-26a-5p表达上调(P＜0.05);PTEN是miR-26a-5p的靶基因,miR-26a-5p升高巨噬细胞PD-L1表达水平,并下调PTEN表达(P＜0.05);巨噬细胞与ERS外泌体共培养,miR-26a-5p和PD-L1表达上升,PTEN表达下降,p-AKT表达升高(P＜0.05);敲低巨噬细胞PTEN表达,PD-L1表达上升(P＜0.01).结论 ERS的HNSCC细胞通过外泌体miR-26a-5p调控PTEN/AKT通路及PD-L1的表达.

作者 焦鹏飞 ^[1] 王泽宇 ^[2] 武和明 ^[3] 姚思玥 ^[1] 王慧琳 ^[2] 姚恩惠 ^[2] 张雨垚 ^[2] 袁毅 ^[3] 钟旖 ^[4] 学术成果认领

作者单位苏州市卫生职业技术学院附属苏州市华夏口腔医院,江苏苏州(215000);江苏省口腔疾病研究重点实验室,江苏南京(210029);江苏省口腔转化医学工程研究中心,江苏南京(210029) ^[1] 江苏省口腔疾病研究重点实验室,江苏南京(210029);江苏省口腔转化医学工程研究中心,江苏南京(210029) ^[2] 江苏省口腔疾病研究重点实验室,江苏南京(210029);江苏省口腔转化医学工程研究中心,江苏南京(210029);南京医科大学附属口腔医院口腔颌面外科,江苏南京(210004) ^[3] 江苏省口腔疾病研究重点实验室,江苏南京(210029);江苏省口腔转化医学工程研究中心,江苏南京(210029);南京医科大学附属口腔医院口腔病理科,江苏南京(210004) ^[4]