摘要目的 运用网络药理学与分子对接方法探讨高山金莲花素(alpinumisoflavone,AIF)对颞下颌关节骨关节炎(temporomandibular joint osteoarthritis,TMJOA)细胞模型的作用机制,为AIF治疗TMJOA提供研究基础.方法 运用GeneCards、OMIM、DisGeNET和PharmGKB数据库获取TMJOA疾病靶点,PharmMapper和HERB获取AIF作用靶点,取化合物与疾病交集靶点上传至STRING数据库得到关键靶点后做GO和KEGG富集分析,分子对接评估相关信号通路中关键靶点.获得医院伦理委员会的审批,提取3周龄SD大鼠髁突软骨细胞.CCK8检测AIF对髁突软骨细胞的毒性.用10 ng/mL白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)诱导髁突软骨细胞24 h构建TMJOA细胞模型.实验分为3组,其中,对照组:DMEM培养基培养髁突软骨细胞48 h;IL-1β组(TMJOA细胞模型):预使用DMEM培养基培养髁突软骨细胞24 h后,保留原培养基的情况下加入IL-1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h;IL-1β+10 μmol/L AIF组:预使用含10 μmol/L AIF的DMEM培养基培养髁突软骨细胞24 h,保留原培养基情况下加入IL-1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h,流式细胞术检测AIF对TM-JOA细胞模型中的髁突软骨细胞凋亡的影响.进一步,实验分为对照组、IL-1β组、IL-1β+10 μmol/L AIF组和IL-1β+30 μmol/L AIF组共4组,其中,IL-1β+30 μmol/L AIF组:预使用含30 μmol/L AIF的DMEM培养基培养24 h,保留原培养基情况下加入IL-1β使终浓度达10 ng/mL继续培养24 h;其余3组方法同前.以qPCR与Western blot分别检测AIF对TMJOA细胞模型中与细胞凋亡相关的B淋巴细胞瘤2(B-cell leukemia/lymphoma-2,Bcl2)、天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease 3,Caspase-3)及基质降解相关的解聚蛋白样金属蛋白酶4(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4,ADAMTS4)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP3)和基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP13)mRNA和蛋白的表达.结果 PharmMapper与HERB数据库检索得到AIF化合物靶点300个,GeneCards、OMIM、DisGeNET和PharmGKB数据库检索得到TMJOA疾病靶点378个,将化合物与疾病靶点交集得33个潜在靶点,将其上传至STRING数据库得31个关键靶点,主要与细胞凋亡和细胞外基质降解相关.这一过程可能涉及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、雌激素及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等信号通路.分子对接结果表明AIF与MAPK和雌激素信号通路中的关键靶点细胞外信号调节激酶1/2(extracellular sig-nal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)和雌激素受体基因1/2(estrogen receptor gene 1/2,ESR1/2)具有较好的结合活性.CCK8结果表明AIF对髁突软骨细胞无明显细胞毒性.与IL-1β组相比,IL-1β+10 μmol/L AIF组中AIF可抑制髁突软骨细胞凋亡;与IL-1β组相比,IL-1β+10 μmol/L AIF组和IL-1β+30 μmol/L AIF组中AIF可上调Bcl2和下调Caspase-3 mRNA和蛋白表达,抑制ADAMTS4、MMP3和MMP13 mRNA和蛋白表达.结论 AIF可通过上调Bcl2与下调Caspase-3 mRNA和蛋白表达抑制TMJOA细胞模型中髁突软骨细胞凋亡,同时抑制由IL-1β诱导的细胞外基质降解,延缓TMJOA进展.