摘要目的 探讨炎性微环境牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)整合素α5(integrinα5)对 NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)表达的影响.方法 获得单位实验动物伦理委员会的批准,以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(0.5、5、50 μg/mL)预处理大鼠PDLFs 24 h后更换为无血清DMEM培养基,24h后收集上清液分别与含10％无外泌体血清的DMEM培养基按体积比1∶1混合获得条件培养基(conditioned medium,CM),记作0.5-CM、5-CM、50-CM,另将含10％无外泌体血清的DMEM培养基记作0-CM.CM组以上述各浓度的CM培养PDLFs;抑制剂组以含有不同浓度整合素 α5 抑制剂 ATN-161(0、0.025、0.25、2.5、25、250 μg/mL)的 0-CM 培养 PDLFs;CCK-8 法检测上述各组CM和整合素α5抑制剂ATN-161对细胞活性的影响.根据CCK-8结果,在进一步的抑制剂干预实验中,将 PDLFs 培养于 0-CM、不含/含 25 μg/mL ATN-161 的 5-CM 及含 25 μg/mL ATN-161 的 0-CM 中,依次为 0-CM组、5-CM组、ATN-161+5-CM组及ATN-161组.利用Western blot及qRT-PCR检测整合素α5和NLRP3表达变化.体内实验将24只大鼠随机分为4组(n=6),对照组为健康大鼠,不做任何处理,其余3组大鼠每3天于大鼠左上颌第一磨牙腭侧分别注射40 μL的含25 μg/mL ATN-161的0-CM或5-CM(不含/含25 μg/mL ATN-161),记作ATN-161组、5-CM组和ATN-161+5-CM组.第30天取大鼠左上颌骨组织行Micro-CT、HE染色及免疫组化检测.结果 CCK-8检测显示,12h、24h时各组CM和25 μg/mL及以下浓度的ATN-161对细胞活性抑制无显著差异(P＞0.05);48h时50-CM和25、250 μg/mL ATN-161均显著抑制细胞活性(P＜0.05).在体外实验,相较于0-CM组,5-CM组大鼠PDLFs中整合素α5和NLRP3在蛋白和mRNA水平表达均显著升高(P＜0.05);25 μg/mL ATN-161干预显著抑制5-CM培养条件下整合素α5和NLRP3的表达(P＜0.05).在体内实验,与对照组相比,5-CM组和ATN-161+5-CM组牙槽骨吸收明显,牙周膜炎性细胞浸润增多,整合素α5和NLRP3阳性表达显著增加(P＜0.01).但ATN-161+5-CM组较5-CM组牙槽骨吸收较轻,牙周膜炎性细胞浸润较少,整合素α5和NLRP3阳性表达明显降低(P＜0.01).结论 体内外实验表明整合素α5介导炎性微环境下PDLFs的NLRP3表达,ATN-161抑制整合素α5表达从而显著下调NLRP3表达,发挥抑制炎症作用.