摘要目的 探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)相关基因在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的预后价值及生物学功能.方法 从癌症基因组图谱数据库(TCGA)和基因表达谱数据库(GEO)获取OSCC的333例转录组数据及6例单细胞测序数据.基于69个NETs相关基因集,采用单因素Cox与Lasso-Cox回归构建OSCC预后风险模型,通过Kaplan-Meier分析和受试者工作特征(ROC)曲线评估模型效能,并进行风险评分与列线图分析.进一步探究NETs风险评分与血管生成、上皮间充质转化(EMT)及细胞周期的关系.采用富集分析注释相关通路功能.通过Kaplan-Meier分析筛选预后关键基因,并进行药物预测与分子对接验证候选靶点.运用单细胞RNA测序分析关键基因组织蛋白酶G(CTSG)在肿瘤微环境(TME)中的表达特征,利用TCGA泛癌及OSCC数据分析CTSG在肿瘤与正常组织中的表达差异,最后采用组织芯片进行免疫组化实验,在蛋白水平验证CTSG的表达.结果 成功构建基于6个NETs相关基因(F3、AKT1、CTSG、VNN3、MPO、IL17A)的风险预后模型.高风险组患者总生存期(OS)显著缩短(P＜0.000 1).模型在预测1、3、5年生存率的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.718、0.820和0.805,NETs风险评分被确立为独立预后因素(P＜0.001),且列线图校准良好.NETs 风险评分与血管生成(r=-0.20,P＜0.001)、EMT(r=0.17,P＜0.01)、G1/S周期(r=0.11,P＜0.05)及 G2/M 周期(r=0.17,P＜0.01)相关.基因集富集分析(GSEA)提示高风险组富集于基底细胞癌等通路,低风险组富集于α-亚麻酸代谢等通路(P＜0.05).Kaplan-Meier分析提示CTSG低表达患者预后较差(P＜0.001);分子对接显示CTSG与谷胱甘肽结合良好(结合能:-7.4 kcal/mol);单细胞分析表明CTSG在肥大细胞亚群中高表达,在恶性细胞中低表达(P＜0.001);TCGA泛癌分析表明CTSG在包括OSCC在内的多种癌组织中低表达(P＜0.05);免疫组化证实癌组织中CTSG表达低于癌旁组织(P＜0.01).结论 本研究构建的NETs相关基因预后模型具有良好的预测性能.CTSG被鉴定为关键预后基因,为OSCC预后评估与靶向治疗提供了新的生物标志物和潜在干预靶点.