摘要目的 探讨牙胚间充质细胞中特异性敲除含SET结构域蛋白2(Setd2)对牙齿早期发育的影响,为牙发育异常疾病的病因探索提供研究基础.方法 本实验已获得武汉大学动物实验中心伦理委员会批准,将C57BL/6J背景的Wnt1Cre 小鼠与Setd2flox/flox 小鼠交配,获得敲除Setd2的实验组(Wnt1Cre;Setd2flox/flox)及对照组(Setd2flox/flox).分别于小鼠胚胎期第13.5天(E13.5)、第15.5天(E15.5)、第18.5天(E18.5)收取小鼠胚胎尾部组织进行聚合酶链式反应(PCR)基因型鉴定,取胚胎头部制备石蜡切片观察下颌第一磨牙牙胚发育情况.采用免疫组织化学染色验证牙胚间充质细胞中Setd2的敲除情况;通过苏木素-伊红(HE)染色及肾囊膜培养分析在牙胚间充质细胞中敲除Setd2对牙齿发育的影响;使用Ki67染色和末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL)染色分析特异性敲除Setd2对牙胚间充质细胞增殖和凋亡的影响;使用免疫荧光染色观察特异性敲除Setd2对蛋白H3第36位赖氨酸位点的三甲基化修饰(H3K36me3)的影响.结果PCR基因型鉴定结果显示,实验组表现为Setd2flox/flox 纯合子单条带(266 bp)及Wnt1Cre 特征性单条带,对照组仅表现为Setd2flox/flox 纯合子单条带(266 bp).免疫组织化学染色结果显示,实验组牙胚间充质细胞中Setd2被成功敲除;HE染色及肾囊膜培养结果显示,与对照组相比,E15.5及E18.5实验组特异性敲除Setd2导致牙胚变小、间充质细胞凝聚增加(E15.5,P<0.05;E18.5,P<0.01);Ki67染色结果显示,E13.5及E15.5实验组与对照组间牙胚间充质细胞的细胞分裂比例差异均无统计学意义(E13.5,P=0.694;E15.5,P=0.503);而TUNEL染色结果显示,E13.5及E15.5实验组牙胚间充质细胞凋亡率均高于对照组(P<0.001);免疫荧光染色结果显示,E13.5、E15.5及E18.5实验组牙胚间充质细胞的H3K36me3修饰缺失(P<0.000 1).结论 牙胚间充质细胞中Setd2的特异性敲除可通过影响H3K36me3修饰导致细胞凋亡增加,从而导致小鼠牙齿早期发育异常,表现为牙胚变小.