换一批乙型肝炎病毒聚合酶基因重组腺病毒表达系统的构建和初步鉴定
Construction and identification of the recombinant adenoviral expressing system with hepatitis B virus reverse polymerase gene
摘要目的 构建乙型肝炎痛毒聚合酶基因(RT/RNaseH区段)腺病毒表达系统并初步鉴定其转录表达.方法 采用PCR方法从pUC19-1.24HBV质粒中扩增RT/RNaseH区段,将该片段与pCMV-Tag2B载体连接构建腺病毒穿梭载体,将其在Bj5183细菌中重组,获得的重组质粒转染到Ad293细胞中包装,待细胞裂解后收集合病毒的上清并感染Huh7细胞,48 h后通过RT-PCR鉴定目的 基因转录.结果 成功扩增HBV RT区并插入pC-MV-Tag2B载体,成功获得腺病毒重组质粒并在AD293中包装成病毒颗粒,病毒颗粒感染Huh7细胞后RT-PCR可以在Huh7细胞中检测到HBV RT区段mRNA转录.结论 成功构建乙型肝炎病毒聚合酶基因RT/RNaseH区段的腺病毒表达系统,该系统能在Huh7细胞中转录,但逆转录蛋白的表达仍待进一步检测.
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