换一批
换一批摘要目的:构建核因子-红细胞2相关因子2(Nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)全身性敲除(Nrf2-KO)、心肌细胞特异性敲除(Nrf2-Flox)和心肌细胞过表达(Nrf2-CTG)3种基因编辑小鼠,为探究Nrf2在心血管代谢性疾病中的具体作用机制提供研究工具.方法:利用CRISPR/Cas9技术构建Nrf2-KO小鼠和Nrf2-Flox小鼠,利用转基因技术构建Nrf2-CTG小鼠.基因编辑小鼠7～10日龄时剪脚趾组织提取DNA,用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因型判定并测序.结果:⑴Nrf2-KO F0代、F1代和F2代小鼠基因组扩展样本在目的条带处(约750 bp)均有清晰单一的阳性条带,野生型小鼠在目的条带处(约2 931 bp)有阳性条带;采用Nrf2-wt-F1/Nrf2-wt-R1引物对F2代小鼠基因组野生型小鼠在目的条带处(约495 bp)有阳性条带,Nrf2-KO鼠无该目的条带.F0代小鼠基因组缺失碱基为Founder小鼠敲除的碱基;⑵Nrf2-Flox F0代、F1代小鼠基因组扩展样本在目的条带处(约150 bp)均有清晰单一的阳性条带.野生型小鼠无该目的条带;⑶Nrf2-CTG F0代、F1代鼠基因组扩展样本在目的条带处(约251 bp)均有清晰单一的阳性条带,野生型小鼠无该目的条带.结论:利用CRISPR/Cas9技术和转基因技术成功构建Nrf2-KO小鼠模型、Nrf2-Flox小鼠模型及Nrf2-CTG小鼠模型.
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关键词
核因子-红细胞2相关因子2心肌细胞CRISPR/Cas9基因编辑小鼠Nuclear factor-erythroid 2 related factor 2CardiomyocyteCRISPR/Cas9Gene editingMice
分类号
Q78
栏目名称
技术与方法
DOI
10.3969/j.issn.1001-5779.2024.04.007
发布时间
2024-05-21
基金项目
国家自然科学基金
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