换一批TP53基因工程抗体的构建、表达筛选及表征鉴定
Construction and expression screening and characterization of genetic engineering antibody against TP53
摘要目的:利用基因工程抗体技术制备TP53重组抗体,并进行临床病理诊断应用的初步探究.方法:将杂交瘤来源的TP53单克隆抗体重链及轻链可变区基因分别与pGEM-T载体连接,测序分析并选择有效重链及轻链序列分别与pFUSEss-CHIg-mG2B、pFUSE2ss-CLIg-mk及pcDNA3.4载体连接.利用ExpiCHO-S? Expression System进行真核表达,经Protein A柱纯化获得TP53重组抗体.最后将TP53重组抗体和商品化TP53抗体进行蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)应用的初步探究.结果:通过抗体表达纯化获得TP53重组抗体,液相色谱-质谱测定结果显示TP53轻链/重链分子量分别为25 kDa和53 kDa,ELISA效价为1∶2 180 000,亲和力测定Ka值为6.6×1010 L·mol-1.WB结果显示TP53重组抗体与商品化TP53抗体表达结果一致.IHC结果显示TP53重组抗体和商品化TP53抗体识别靶标均定位于细胞核,在人肾癌、人乳腺叶状腺癌、人乙状结肠腺癌及小鼠肝癌中的检测结果一致,且TP53重组抗体在人高分化鳞癌、人肝细胞癌和人乳腺癌中的免疫组化检测效果优于商品化的TP53抗体.结论:本研究成功制备了小鼠抗人TP53重组抗体,并为临床病理诊断提供初步的数据支持.
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关键词
TP53单克隆抗体抗体,单克隆基因工程抗体技术载体构建免疫组织化学TP53 monoclonal antibodyAntibody,monoclonalGenetically engineered antibody technologyVector constructionImmunohistochemistry
分类号
R36（病理学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1001-5779.2024.06.004
发布时间
2024-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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