换一批摘要用不同温度处理蛋白酶K,以变性酪蛋白底物法测定酶活力,稳态/瞬态荧光光谱法和圆二色谱法测定空间构象和二级结构,研究温度对蛋白酶K酶活力和构象的影响.温度由25℃升高至65℃过程中,蛋白酶K的酶活力逐渐降低,半衰期缩短；发射光谱荧光强度降低,峰位由335 nm红移至354 nm;色氨酸残基同步荧光强度降低,酪氨酸残基同步荧光强度增大；色氨酸残基荧光寿命由4.4271 ns降低至4.0324ns;α-螺旋百分含量降低.结果表明:采用稳态/瞬态荧光光谱法和圆二色谱法能较简便、准确的描述蛋白酶K的热稳定性变化；蛋白酶K的热变性过程符合三态模型,存在一个中间态；蛋白酶K分子内部存在酪氨酸残基对色氨酸残基的共振能量转移作用；α-螺旋是维系蛋白酶K活性中心构象稳定性的主要结构.
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关键词
蛋白酶K热稳定性稳态荧光光谱瞬态荧光光谱圆二色谱Proteinase KThermal stabilitySteady-state fluorescenceTime-resolved fluorescenceCircular dichroism
分类号
Q55（酶）
DOI
10.3964/j.issn.1000-0593(2013)07-1749-05
发布时间
2013-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30973659）
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