换一批pPIC9 K-IL-2重组质粒的构建及其在毕赤酵母中的表达
Construction of recombinant pPIC9K-IL-2 and expression in Pichia pastoris
摘要根据 Ovis aries interleukin (IL-2)序列设计1对引物,用 PCR法扩增的目的基因进行克隆,将测序正确的IL-2基因片段和表达载体 pPIC9K 同时双酶切后相连,构建 pPIC9K-IL-2重组表达载体。将线性化的载体pPIC9K-IL-2电转化毕赤酵母 GS115,对重组酵母转化子经 MD平板筛选和 PCR 分析鉴定后,用 G418(4 g/L)筛选到多拷贝菌株,进行不同条件下甲醇诱导表达。结果表明：经 PCR鉴定 IL-2基因已整合到酵母基因组中,表达产物经 SDS-PAGE电泳分析发现相对分子质量约为18 ku目的蛋白表达条带,本研究成功构建了高效表达重组羊IL-2毕赤酵母菌株,为新型细胞因子佐剂的研发奠定了基础。
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