苹果多酚对小鼠巨噬细胞TNF信号通路的影响

Effect of apple polyphenols on TNF pathway in murine macrophage

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摘要[目的]通过苹果多酚 (apple polyphenols, APs) 处理RAW264.7小鼠巨噬细胞, 以探讨苹果多酚的生物学作用.[方法]通过MTT试验确定苹果多酚的处理质量浓度, 保证细胞的存活率;将RAW264.7巨噬细胞用10μg/mL的苹果多酚处理4h后, 提取其总RNA, 反转录后通过基因芯片技术检测, 比较试验组与对照组TNF信号通路中基因表达量的差异, 并进行生物信息学分析和实时荧光定量PCR验证.[结果]苹果多酚质量浓度为10μg/mL时, 能够显著 (P<0.05) 促进RAW264.7巨噬细胞的增殖能力, 而质量浓度为5μg/mL时, 对巨噬细胞增殖能力的影响并不显著 (P>0.05) ;基因芯片数据共筛选出差异倍数2倍以上的基因为3 149个 (≥2-fold, P≤0.5) , 其中1 540个基因在RAW264.7巨噬细胞中表达上调, 1 609个基因表达下调.基因体本轮 (GO) 分析结果显示:这些差异基因主要与核苷酸结合、DNA修复、细胞周期、细胞骨架与细胞核等相关, 涉及的信号通路包括类固醇生物合成、真核细胞核糖体合成、TNF信号通路、抗生素生物合成、多巴胺能神经突触、烟酸和烟酰胺代谢等.但为了进一步研究TNF信号通路, 利用qPCR验证该通路上 (Map3k8、Mlkl、Pik3ca、Cflar、Atf2、Tnf) 6个差异基因的表达, 其中, Map3k8、Mlkl、Tnf 3个差异基因被显著 (P<0.05) 下调, 而Pik3ca、Cflar、Atf2 3个基因则下调不显著 (P>0.05) .[结论]研究苹果多酚对TNF信号通路中差异表达基因的影响, 对探索疾病发生发展的机制具有重要意义.