小肠隐窝细胞株药理实验方法的建立

Establishment of pharmacological experimental methods of rat small intestinal crypt cell line

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摘要目的：建立小肠隐窝细胞株（IEC-6）药理实验方法。方法：观察细胞接种密度、α-二氟甲基鸟氨酸（DFMO）和胃泌素对IEC-6细胞增殖及细胞鸟氨酸脱羧酶（ODC）的影响。结果：较高接种密度（＞0.5×104细胞/孔）组，接种后第2天，细胞生长抑制，尤其是密度增加到4×104细胞/孔时，第2～3天，OD值逐渐增加，第4天明显增加，第5天达高峰，此后OD值开始下降。而低密度（0.2×104细胞/孔）接种后第4天，细胞生长出现抑制，此后其生长与其他密度相似。加入DFMO后1～3天，完全抑制了细胞增殖，此后与空白组一样，细胞逐渐生长。 DFMO还明显抑制IEC-6细胞分化和移行，以及 ODC活性和腐胺含量，与空白组比较具有显著性差异（P＜0.01）。IEC-6细胞在胃泌素250μg·L-1作用后第一天，开始增殖，第3天达高峰。胃泌素500μg·L-1作用后第1～2天，细胞开始增殖，第3天以后，细胞增殖下降。胃泌素明显促进细胞分化和移行。与空白组比较，胃泌素250μg·L-1分别使ODC mRNA水平，ODC活性，腐胺含量增加1.09倍（P＜0.05），1.71倍（P＜0.01）和5.30倍（P＜0.01）。同样，胃泌素500μg·L-1可使以上3项指标分别升高1.16倍（P＜0.05），1.63倍（P＜0.05）和4.41倍（P＜0.01）。但胃泌素两个剂量组之间无显著性差异。结论：IEC-6细胞是进行胃肠粘膜修复药理实验的合适细胞模型。