换一批药用植物诃子ISSR-PCR反应体系的建立与优化
Establishment and optimization of ISSR-PCR reaction system for Terminalia chebula Retz.
摘要目的 建立和优化药用植物诃子的ISSR-PCR反应体系.方法 以诃子叶片为实验材料,采用CTAB法提取诃子DNA为模板,通过单因素和双因素实验,研究诃子ISSR-PCR反应体系中DNA模板、Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、dNTPs等的用量,以及退火温度对扩增结果的影响.结果 建立了适合诃子ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在50μL体系中含有1×PCR Buffer、DNA模板50～100 ng、Taq DNA聚合酶3 U、Mg2+ 2 mmol/L、引物0.8 mmol/L、dNTPs 0.3 mmol/L.扩增程序为94℃预变性5 min;94℃变性30 s,根据不同引物的退火温度复性30 s,72℃延伸1.5 min,共35个循环;最后72℃延伸5 min;反应结束后,4℃保存.同时筛选出9条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.结论 这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行诃子鉴定及种质资源遗传多样性分析奠定了基础.
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分类号
R282.5（中药学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1006-8783.2011.02.008
发布时间
2011-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家环境保护总局项目（YSZ-428-0810）
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