SiRNA 沉默 HBx 对 HepG2.2.15细胞人端粒酶逆转录酶基因表达的影响
Effect of HB x siRNA on hTERT gene expression of human hepatocellular carcinoma cell HepG ;2 .2 .15
摘要目的:探讨应用RNA干扰技术沉默 HBx 对 HepG2.2.15细胞中hTERT基因表达的影响。方法(1)将pSIHBV/X质粒转染 HepG2.2.15细胞,RT-PCR法评估沉默效率。(2)MTT法检测转染24 h、48 h、72 h后细胞增殖情况。(3)Real-time PCR和Western blot检测hTERT 表达情况。结果测序结果显示 pSIHBV/X 质粒构建正确;RT-PCR检测 HBV x 基因的沉默效率为53.6%;M T T检测结果显示转染24 h、48 h、72 h后 HepG2.2.15细胞的增殖受抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Real-time PCR和Western blot检测结果均显示,转染pSIHBV/X质粒后 HepG2.2.15细胞中hTERT基因的mRNA水平和蛋白水平表达分别有不同程度的下调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 siRNA沉默 HBx基因可抑制 HepG2.2.15细胞中癌症标志基因hT ERT的表达。
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