换一批ASCT2胞外域ECL2原核可溶性表达条件的优化及其纯化
Optimization of Prokaryotic Expression and Purification of Soluble ASCT2 Extracellular Domain ECL2
摘要目的 构建重组人ASCT2胞外域ECL2融合蛋白的原核表达载体,优化其在大肠埃希菌中可溶性表达的条件,并获得纯化的ECL2蛋白.方法 以PCR方法扩增编码ECL2的DNA片段,插入至pET-41b载体中,构建ECL2的原核表达载体,转化至大肠埃希菌,优化可溶性表达条件,GSH-Agarose亲和层析纯化并鉴定,与MCF-7细胞结合活性的测定.结果 免疫印迹显示,ECL2融合蛋白既表达于包涵体中,也能以可溶性形式表达.随IPTG浓度的增高,可溶性表达水平提高;培养温度为28 ℃和33 ℃时可溶性产物高于37 ℃;而随诱导时间的延长至12 h以上,可溶性表达量下降.可溶性表达优化条件为:温度33 ℃、IPTG浓度0.4 mmol/L、诱导时间4 h.经亲和层析获得高纯度ECL2蛋白并具有与MCF-7细胞结合活性.结论 优化了ECL2融合蛋白的可溶性表达条件,通过亲和层析一步法可获得高纯度融合蛋白.
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关键词
中性氨基酸转运蛋白2胞外结构域可溶性表达合胞素neutral amino acid transporter type 2extracellular domainsoluble expressionsyncytin
栏目名称
DOI
10.3870/j.issn.1672-8009.2010.02.007
发布时间
2010-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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