M2型巨噬细胞来源外泌体调控HGF/c-Met通路参与多发性骨髓瘤细胞转移的作用研究
Effect of M2-type Macrophage-derived Exosomes on Multiple Myelo-ma Cell Metastasis by Regulation of HGF/c-Met Pathway
摘要目的 探究M2 型巨噬细胞来源的外泌体对人多发性骨髓瘤细胞转移的影响及机制.方法 在体外将THP-1 细胞诱导分化成M0 型和M2 型巨噬细胞,实时荧光定量聚合酶反应(RT-qPCR)检测诱导后M2 型巨噬细胞标志物血红蛋白清道夫受体(CD163)、白细胞介素-10(IL-10)、精氨酸酶-1(Arg-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达水平,分离M2 型巨噬细胞来源的外泌体;将RPMI-8226 细胞分为对照组、M0-Exos组、M2-Exos组,Transwell小室法检测细胞迁移数目与侵袭数目,蛋白质印迹检测细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)及转录因子 Snail的表达水平,并检测肝细胞生长因子(HGF)/c-Met相关蛋白的表达水平;接着将 RPMI-8226 细胞分为对照组、M2-Exos组、SU11274 组、SU11274+M2-Exos组,Transwell小室法检测细胞迁移数目与侵袭数目,蛋白质印迹检测细胞中N-cadherin、Vimentin、E-cadherin及Snail表达水平.结果 与M0 型巨噬细胞比较,M2 型巨噬细胞中CD163、IL-10、Arg-1、TGF-β1 的mRNA表达水平均显著上调(P<0.05);从M2 型巨噬细胞中分离的颗粒物中有CD9、CD63、TSG101、ALIX蛋白表达,由此判定该颗粒物为外泌体.与对照组比较,M2-Exos组细胞迁移与侵袭数目均显著增加(P<0.05),N-cadherin、Vimentin、Snail 蛋白表达显著增加(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.05),HGF蛋白表达及p-c-Met/c-Met比值也显著增加(P<0.05).与M2-Exos组比较,SU11274+M2-Exos组细胞迁移与侵袭数目显著减少(P<0.05),N-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达显著减少(P<0.05),且E-cadherin蛋白表达显著增加(P<0.05).结论 M2型巨噬细胞来源的外泌体能够促进人多发性骨髓瘤细胞迁移、侵袭及EMT,加剧肿瘤细胞转移,该作用与调控HGF/c-Met通路有关.
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