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改良固相吸附法在 HCV RNA实时荧光定量检测中的应用

Application of modified solid-phase adsorption method in real-time fluorescence quantification of HCV RNA

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摘要目的：通过对固相吸附法的改良，探讨采用固相吸附法提取血清中丙型肝炎病毒RN A在实时荧光定量检测中的应用。方法首先对HCV RNA的提取方法进行改良，对固相载体纳米二氧化硅颗粒表面进行硅醇基化以提高其核酸吸附能力；同时对病毒裂解液进行优化，获得异硫氰酸胍（GuSCN ）的最佳浓度用于 HCV RNA 的提取；最后使用改良方法提取的 HCV RNA进行实时荧光定量PCR实验，并绘制其标准曲线，计算出线性方程，同时检测该提取方法下实时荧光定量PCR对血清样本中HCV RNA的最低检测限并对其检测重复性进行验证。结果纳米二氧化硅颗粒硅醇基化后其吸附核酸的能力显著提高；病毒裂解液中GuSCN的最佳浓度为4．23 mol/L。使用改良方法提取血清样本中的HCV RNA用于实时荧光定量PCR ，获得标准曲线和线性方程，其线性相关系数（R2）达到0．999，检测的线性范围为2．52～5．52 IU/mL ，或者102．52～105．52病原体数/毫升。该方法的检测限达到（2．52±0．50）IU/mL ，且其检测重复性良好。结论改良后的固相吸附法可以大大降低实时荧光定量PCR的最低检测限，提高了HCV的阳性检测率。该方法操作简单，成本低，可以广泛应用于临床中HCV的检测和其他病毒的核酸检测。