换一批
换一批人胱硫醚β合酶I278T突变体的表达、纯化及鉴定
Expression,purification and identification of I278T-mutant human cystathionine βsynthase
摘要探讨在大肠埃希菌中重组表达和纯化人胱硫醚β合酶CBS（I278T ）突变体。方法采用重叠延伸聚合酶链反应（PCR）定点突变技术构建突变质粒pGEX4T-1-CBS（I278T ），在含有3％乙醇的培养基中诱导表达，亲和层析纯化得到突变CBS （I278T）蛋白，测定纯化蛋白的活性、紫外可见吸收光谱、蛋白粒径及Zeta电位。结果成功构建了质粒pGEX4T-1-CBS（I278T）。CBS（I278T ）蛋白产率、比活性及酶活性回收率分别为2．3 mg/L、21．4 U/mg、22．6％。终浓度为1 mmol/L的 S-腺苷甲硫氨酸（AdoMet）对突变CBS（I278T）蛋白没有激活作用。紫外可见吸收光谱分析显示纯化的突变CBS（I278T）存在429 nm和550 nm的血红素结合蛋白特征吸收峰。蛋白平均粒径为7．5～10．1 nm ，主要以四聚体形式存在，Zeta电位为-16．3 mV。结论成功建立了在大肠埃希菌中表达、纯化及鉴定突变CBS（I278T ）的方法。
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DOI
10.3969/j.issn.1673-4130.2014.09.001
发布时间
2014-06-11
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