LAMP法检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌OXA-23基因的研究

The LAMP method applied in the detection of carbapenem-resistance acinetobacter baumannii OXA-23 genes

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摘要目的：建立一种简便、快速、特异、灵敏的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（CRAB）OXA-23基因分子检测方法，并用于临床标本检测，以便了解产 OXA-23酶 CRAB 的耐药分布状况。方法运用环介导等温扩增技术（LAMP），利用 PrimerExplorer 4．0软件设计一套特异引物检测 CRAB 的 OXA-23基因。通过优化 LAMP 检测方法的实验条件，应用 SYBR Green I 作为 LAMP反应荧光显色物质，然后通过肉眼目测或电泳检测比较结果。同时，应用 LAMP 检测该院自2013年12月至2014年3月收集分离的41株多重耐药鲍曼不动杆菌。结果CRAB 的 OXA-23基因菌株 LAMP 反应电泳产生了阶梯状条带，而其他不同菌株和阴性对照没有条带；向扩增产物中加入1μL SYBR Green Ⅰ，CRAB 的 OXA-23基因菌株 LAMP 扩增产物的颜色由橙色变为绿色，而其他不同菌株和阴性对照仍为橙色；并检测出 CRAB 的 OXA-23基因菌株纯培养物的灵敏度达到了5 cfu／μL。对41株我院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌进行 LAMP 检测，检出 OXA-23基因32株，检出率为78．04％。结论该院分离的 CRAB OXA-23基因的携带率较高，对常用抗菌药物有非常高的耐药率；本研究建立的 LAMP 技术检测 CRAB OXA-23基因是一种简便、快速、特异、灵敏的耐药鲍曼不动杆菌检测方法，适于基层单位推广使用，对临床医生合理选择抗生素具有重要意义。