换一批
换一批腺苷脱氨酶三种原核表达载体的构建及蛋白表达
A study to construct three prokaryotic expression vectors and its expression in adenosine deaminase
摘要目的 利用分子克隆技术表达腺苷脱氨酶蛋白.方法 从人白细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,再以其为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增腺苷脱氨酶基因,然后将目的基因连接到3种原核质粒pET-28b、pET-32a(+)和pHSIE中,再将测序完全正确的克隆质粒用CaCl2法转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白表达,并筛选最优表达条件,经Western-blot和SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况.结果 3种质粒载体携带的目的基因DNA测序结果证实其很好地连接入载体质粒,表达的ADA蛋白经Western-blot和SDSPAGE鉴定符合,最优表达条件为诱导剂IPTG浓度0.4mmol/L,表达温度为16℃,表达时间为24h.结论该实验成功构建了腺苷脱氨酶的3个原核载体(BL21+pET-28b+ADA,BL21+pET-32a+ADA,BL21+pHSIE+ADA),且3个载体均成功高效表达了腺苷脱氨酶蛋白.
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关键词
腺苷脱氨酶ADA原核载体pET-28bpET-32apHSIE蛋白表达adenosine deaminaseADAprokaryotic vectorpET-28bpET-32apHSIEprotein expression
分类号
R34
栏目名称
论著·基础研究
DOI
10.3969/j.issn.1673-4130.2019.03.007
发布时间
2019-05-31
基金项目
国家自然科学青年基金
中国博士后科学基金
广东省中医院院内专项
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