换一批SV2A基因真核表达质粒构建及其在HEK293T细胞中的表达
Construction of eukaryotic expression plasmid of SV2A gene and its expression in HEK293T cells
摘要目的 构建鼠突触囊泡蛋白2A(SV2A)基因的真核表达质粒,并瞬时转染至人胚肾细胞(HEK293T)中,对其表达进行鉴定.方法 以APP/PS1双转基因小鼠海马组织的cDNA为模板,扩增得到长2 239 bp的SV2A基因编码序列,将此序列插入到真核表达载体p3×Flag-CMV-10多克隆位点区域中,得到真核表达质粒p3×Flag-CMV-10-SV2A,转化后挑取单克隆菌落经双酶切鉴定后送公司测序,将构建成功的重组质粒转染至HEK293T细胞中,利用蛋白质印迹法(Western blot)检测SV2A基因的表达情况.结果 成功构建p3×Flag-CMV-10-SV2A重组质粒,并在转染至HEK293T细胞后,验证了相应蛋白表达.结论 利用分子克隆技术成功构建了p3×Flag-CMV-10-SV2A真核表达质粒并在HEK293T细胞中正确表达,为后续实验奠定了基础.
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DOI
10.3969/j.issn.1673-4130.2020.03.005
发布时间
2020-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81472007）
北京市医管局人才培养计划登峰项目（DFL20180803）
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