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基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法的建立

Establishment of rapid detection method for zika virus based on direct amplification RT-PCR technique

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摘要目的建立基于直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术的寨卡病毒快速检测方法.方法采用特殊功能的DNA聚合酶,以及优选PCR增强剂,以此建立直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测5种样本(全血、血清、唾液、咽拭子和尿)的方法.结果 5种样本检测限分别为血清103 PFU/mL,尿、咽拭子和唾液102 PFU/mL,全血104 PFU/mL,标准曲线的拟合优度的可决系数均在0.98以上,扩增效率均在90％～110％;寨卡病毒核酸成功扩增,非寨卡病毒核酸均未能扩增;尿、全血和唾液样本的重复性实验中106 PFU/mL和102 PFU/mL两个浓度的6个重复Ct值的变异系数均＜5％.该研究建立的直扩RT-PCR技术的寨卡病毒检测方法与常规RT-PCR技术的检测结果一致,8个寨卡病毒样本,均只检测出2个血清样本,其余62个非寨卡病毒样本及12个阴性样本均未得到扩增.结论成功建立基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法,该方法简便快捷且灵敏度高、特异度强.

作者李浪 ^[1] 古莉冰 ^[2] 朱丽 ^[3] 何建安 ^[4] 叶颖 ^[3] 张然 ^[3] 李华文 ^[5] 李福缘 ^[6] 顾大勇 ^[4] 学术成果认领

作者单位广东医科大学公共卫生学院,广东东莞 523808;深圳市检验检疫科学研究院,广东深圳 518033 ^[1] 中华人民共和国深圳海关,广东深圳 518026 ^[2] 深圳国际旅行卫生保健中心/深圳海关口岸门诊部,广东深圳 518045 ^[3] 深圳市检验检疫科学研究院,广东深圳 518033;深圳国际旅行卫生保健中心/深圳海关口岸门诊部,广东深圳 518045 ^[4] 广东医科大学公共卫生学院,广东东莞 523808 ^[5] 深圳市宝安区中医院社区健康服务管理中心,广东深圳 518133 ^[6]

关键词寨卡病毒直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术 DNA聚合酶 zika virus direct amplification real-time fluorescent quantitative reverse transcription poly-merase chain reaction technique DNA polymerase

分类号 R446.5（诊断学）

栏目名称

论著

DOI 10.3969/j.issn.1673-4130.2024.03.019

发布时间 2024-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

广东省科技计划资助项目（2016A020219005）海关总署科研项目（2021HK143）