换一批
换一批基于实时荧光重组酶聚合酶扩增技术的铜绿假单胞菌快速检测方法的建立
Establishment of a rapid detection method for Pseudomonas aeruginosa based on real-time fluorescent recombinase polymerase amplification technology
摘要目的 针对铜绿假单胞菌毒力基因exoS,建立一种实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)技术检测方法,并评价该方法的特异性、灵敏度及实用性.方法 根据铜绿假单胞菌毒力基因exoS的特异性保守区域,设计RPA特异性引物和探针,对提取的目标DNA进行检测,确定RPA方法的特异性和灵敏度;建立实时荧光定量PCR(qPCR)法,对目标DNA进行检测,比对不同检测方法对铜绿假单胞菌的检出限;通过临床样本性能验证试验,进一步确定RPA技术检测铜绿假单胞菌的可行性.结果 建立的RPA检测方法特异性良好,仅对铜绿假单胞菌有特异扩增曲线,对其他细菌无特异扩增曲线;RPA方法检测病原菌的灵敏度为5 × 102 cfu/mL,该方法与qPCR法检出限一致且结果可靠;RPA方法检测时间仅需30 min,明显短于传统方法的检测时间.结论 该研究建立的铜绿假单胞菌RPA检测方法特异性强、灵敏度高,相对于传统检测方法明显缩短检测时间,可用于临床标本中铜绿假单胞菌的快速检测.
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关键词
铜绿假单胞菌exoS基因实时荧光重组酶聚合酶扩增Pseudomonas aeruginosaexoS genereal-time fluorescent recombinase polymerase ampli-fication
分类号
R446.5
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1673-4130.2024.19.005
发布时间
2024-11-19
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