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基于DTT-结晶紫的DNA定量方法的建立

Establishment of a DNA quantitation method based on DTT-crystal violet

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摘要目的建立一种基于二硫苏糖醇(DTT)-结晶紫的DNA定量方法.方法将DTT用于结晶紫的脱色处理后,与不同浓度的λ-DNA和鱼精DNA标准品或标准样本混合,利用酶标仪在595 nm波长读取吸光度,并与紫外吸光法的结果进行比较.DTT-结晶紫法和紫外吸光法对质粒样本浓度及宫颈脱落细胞基因组DNA样本浓度进行测量比较.以牛血清白蛋白(BSA)模拟蛋白杂质评价两种方法对蛋白杂质的耐受性.结果在测定λ-DNA和鱼精DNA时,DTT-结晶紫法在595 nm处的吸光度与DNA浓度之间有良好的线性关系(r2＞0.95).DTT-结晶紫法测量标准样本浓度与所配制的标准样本理论浓度比较差异无统计学意义(P＞0.05).DTT-结晶紫法和紫外吸光法测量质粒样本浓度比较差异无统计学意义(P＞0.05).紫外吸光法与DTT结晶紫法测量宫颈脱落细胞基因组DNA样本浓度呈正相关(r=0.94,P＜0.01).紫外吸光法测量含BSA为1 μg/μL的DNA标准样本浓度显著高于对照样本浓度,差异有统计学意义(P＜0.01),而DTT-结晶紫法并未受到BSA的显著影响(P＞0.05).结论 DTT-结晶紫法相较于现有的DNA定量方法具有明显优势,适用于科研和临床中的DNA定量分析.

作者叶玉钦 ^[1] 曹璜 ^[2] 吴绪峰 ^[3] 谭尧 ^[4] 马全富 ^[3] 学术成果认领

作者单位武汉科技大学医学院,湖北武汉 430065;湖北省妇科恶性肿瘤临床医学研究中心,湖北武汉 430070 ^[1] 湖北省妇幼保健院医学遗传中心,湖北武汉 430070 ^[2] 湖北省妇科恶性肿瘤临床医学研究中心,湖北武汉 430070 ^[3] 湖北省妇幼保健院产科,湖北武汉 430070 ^[4]

关键词二硫苏糖醇结晶紫 DNA定量 dithiothreitol crystal violet DNA quantitation

分类号 R446.1（诊断学）

栏目名称

论著

DOI 10.3969/j.issn.1673-4130.2025.13.007

发布时间 2025-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

湖北省自然科学基金面上项目（2023AFB1064）