换一批RAA-CRISPR双模式平台在肺炎支原体快速检测中的应用
Application of RAA-CRISPR dual-mode platform in rapid detection of Mycoplasma pneumoniae
摘要目的 建立基于重组酶介导等温核酸扩增(RAA)、CRISPR/Cas12a及侧向流层析试纸条(LFIA)技术的肺炎支原体(MP)双模式快速检测平台.方法 靶向MP P1基因保守区设计RAA引物及crRNA.系统优化RAA反应时间、CRISPR/Cas12a体系核心组分浓度及CRISPR反应时间等关键参数,通过实时荧光监测/LFIA裸眼可视化判读双模式,评估该平台的分析性能:灵敏度(梯度稀释MP质粒模板,10-1～105 copy/μL)、特异度(7种呼吸道病原体包括人型支原体、肺炎衣原体等)及临床一致性[以实时荧光定量PCR(qPCR)为金标准验证25例咽拭子样本].结果 建立的RAA-CRISPR双模式平台最佳反应条件为RAA反应时间15 min、Cas12a 80 nmol/L、crRNA 90 nmol/L、CRISPR 反应时间 40 min.荧光模式检测限(LOD)为 1 copy/μL,检出率达 98.3％(59/60,95％CI:94.7％～99.8％);LFIA 模式 LOD 为 1 copy/μL,检出率达 96.7％(58/60,95％CI:88.4％～99.5％);与所有测试病原体无交叉反应.临床验证结果显示,该平台检测结果与qPCR完全一致,灵敏度、特异度及总符合率均为100.0％,检测时间较短,全程≤55 min.结论 建立的RAA-CRISPR 双模式平台兼具超敏性、可视化及操作便捷性,可为MP感染的基层即时检验(POCT)提供高效解决方案.
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关键词
肺炎支原体重组酶介导等温核酸扩增CRISPR/Cas12a侧向流层析试纸条可视化检测Mycoplasma pneumoniaerecombinase aided amplificationCRISPR/Cas12alateral flow immunochromatographic assayvisual detection
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1673-4130.2025.22.002
发布时间
2025-12-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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