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DNA荧光编码微球技术的建立及其在肝母细胞瘤miRNA多重检测中的应用分析

Establishment of DNA fluorescent-encoded microsphere technology and its application analysis in multiplex detection of hepatoblastoma-associated miRNAs

摘要目的 建立基于 DNA 荧光编码微球技术的多重微小核糖核酸(miRNA)检测方法,验证其在肝母细胞瘤(HB)相关 miRNA 多重检测中的临床应用价值.方法 基于计算机辅助设计(CAD)的四发夹杂交链式反应(qHCR)系统,构建四色荧光(Pacific Blue、FAM、TAMRA、Cy5)编码微球体系,通过激光共聚焦显微镜对微球的荧光编码性能、形态特征进行表征;以 HB相关的 7种 miRNA(miR-21、miR-26a、miR-27a、miR-122、miR-192、miR-801、miR-223)为靶标,评估方法的检出限、线性范围及特异性;并进一步在血清模拟样本中,采用该方法进行7种 miRNA同时检测,验证其多重分析性能.结果 成功构建四色 DNA 荧光编码微球体系,微球粒径均一,荧光信号稳定性良好.该方法对 HB相关 miRNA 的检出限为 1.99 pmol/L(R2>0.97),且能同时检测 HB组中 7种 miRNA.结论 基于 DNA 荧光编码微球的多重 miRNA 检测技术具有高灵敏度、高特异性及多重分析能力,可实现 HB相关 miRNA 的快速多重检测,为 HB的早期诊断和病情监测提供新的技术支撑.

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