摘要目的:压力负荷性心脏纤维化是心力衰竭进展的关键环节,目前临床缺乏有效的抗纤维化治疗靶点.微纤维相关蛋白质5(microfibril-associated protein 5,MFAP5)在肿瘤纤维化中发挥重要作用,但其在压力负荷性心脏纤维化中的作用未知.本研究旨在利用腺相关病毒血清型9(adeno-associated virus serotype 9,AAV9)载体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)即AAV9-MFAP5-RNAi特异性敲低MFAP5,探讨其对经主动脉弓缩窄(transverse aortic constriction,TAC)诱导的小鼠压力负荷性心力衰竭模型中心肌纤维化及心功能的影响,并阐明其相关分子机制.方法:将7～8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组(n=6):假手术组(Sham组)、Sham+AAV9-MFAP5-RNAi组、TAC组、TAC+AAV9-MFAP5-RNAi组(TAC+AAV9组).TAC模型通过行横向主动脉结扎术构建,以模拟压力负荷性心力衰竭.AAV9-MFAP5-RNAi(5×1011 vg/mL)于术前2周经尾静脉单次注射.术后4周,采用超声心动图测量左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)、左心室舒张末期内径(left ventricular internal diameter at end-diastole,LVIDd)及左心室后壁舒张期厚度(left ventricular posterior wall thickness at end-diastole,LVPWd).超声检查结束后处死小鼠,取出心脏,剥离右侧胫骨,计算心脏重量/体重比(heart weight/body weight ratio,HW/BW)和心脏重量/胫骨长度比(heart weight/tibia length ratio,HW/TL)以评估心脏肥厚程度.Masson染色计算心肌胶原沉积面积百分比,评估心肌纤维化程度.蛋白质印迹法检测心肌组织中MFAP5、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(collagen I)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)、成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)、Smad2(Smad family member 2)及磷酸化Smad2(phosphorylated Smad family member 2,p-Smad2)蛋白表达水平,评估小鼠心肌纤维化水平及相关信号通路的激活状态.结果:与Sham组比较,TAC组小鼠LVEF和LVFS均显著降低(均P<0.001),LVIDd显著增高(P<0.001),而LVPWd无显著变化(P>0.05);HW/BW和HW/TL均显著升高(均P<0.001).Masson染色显示TAC组心肌胶原相对面积显著高于Sham组(P<0.001).蛋白质印迹法结果显示,TAC组心肌组织中MFAP5、α-SMA、collagen I、collagen Ⅲ、FAP、TGF-β1及p-Smad2/Smad2比值均显著高于Sham组(均P<0.05).与TAC组比较,TAC+AAV9组LVEF和LVFS明显改善(均P<0.01),LVIDd减小(P<0.01),HW/BW和HW/TL均降低(分别P<0.001和P<0.01),心肌胶原相对面积减少(P<0.001).TAC+AAV9组上述蛋白质表达水平均显著低于TAC组(均P<0.05).结论:AAV9-MFAP5-RNAi介导的MFAP5下调可改善TAC诱导的小鼠心功能下降,减轻心肌纤维化和心脏重塑,其机制与抑制TGF-β1/Smad2信号通路激活有关.