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炭疽芽胞杆菌A16D2株BA2380基因缺失突变株的构建

Construction of BA2380 deletion mutant of Bacillus anthracis strain A16D2

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摘要本课题组早期研究结果表明,炭疽芽胞杆菌BA2380蛋白可能与炭疽芽胞杆菌毒力有关,因而有必要对其功能进行深入研究.选取炭疽芽胞杆菌A16D2株为出发菌株,以其BA2380基因为目的缺失基因,参照A16D2株基因组序列及质粒pSET4s序列,利用软件设计上下游同源臂及抗性基因引物,用本实验室改造的"Golden Gate"克隆方法将3个片段同时连入温敏型穿梭载体pKMBK中(本实验室构建的受体质粒),从而构建基因打靶质粒.将该基因打靶质粒导入炭疽芽胞杆菌A16D2感受态细胞中,利用同源重组原理,筛选获得炭疽芽胞杆菌A16D2 BA2380基因缺失突变株,并对其进行验证.结果验证了本课题组构建的"Golden Gate"克隆体系进行多片段克隆的高效性,也为后续探索其基因功能奠定了基础.

作者贾书骅 ^[1] 陈楠 ^[2] 王东澍 ^[3] 王甜甜 ^[3] 冯尔玲 ^[3] 朱力 ^[3] 王恒樑 ^[3] 彭清忠 ^[4] 刘先凯 ^[3] 学术成果认领

作者单位吉首大学,吉首 416000;军事医学科学院生物工程研究所,北京 100071 ^[1] 军事医学科学院生物工程研究所,北京 100071;沈阳师范大学化学与生命科学学院,沈阳 110034 ^[2] 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 ^[3] 吉首大学,吉首,416000 ^[4]

关键词炭疽芽胞杆菌 GoldenGate克隆基因替换同源重组 Bacillus anthracis "Golden Gate" cloning Gene replacement Homologous recombination

医学主题词炭疽(Anthrax)基因(Genes)基因缺失(Gene Deletion)突变(Mutation)同源重组(Homologous Recombination)

栏目名称

论著

DOI 10.3969/j.issn.1673-6184.2017.03.006

发布时间 2017-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

国家自然科学基金（81271785）国家自然科学基金（81601739）