去N端信号肽的水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E的原核可溶性表达及其免疫原性评价

Soluble prokaryotic expression of varicella-zoster virus glycoprotein E without N-terminal signal peptide and its immunogenicity evaluation

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摘要水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus,VZV)糖蛋白E(glycoprotein E,gE)是VZV亚单位疫苗的主要候选蛋白,但目前原核表达系统制备的gE蛋白以包涵体形式为主,可溶性差.本研究采用去除第1～30氨基酸序列的VZV gE胞外域基因,将其与原核表达载体pET32a连接,并转化至感受态细胞BL21(DE3)中.使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,His-tag柱纯化重组gE蛋白,蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测其特异性.用该重组gE蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光法检测多克隆抗体效价及特异性.结果显示,BL21/pET32a-VZV gE工程菌可以表达可溶性重组gE蛋白,纯化后纯度约为90％.WB鉴定该重组蛋白具有良好的免疫反应性.ELISA检测显示小鼠抗VZV gE多克隆抗体效价＞1∶10 000,间接免疫荧光实验结果显示该抗体特异性较高.结果表明,本研究在原核表达系统中成功表达可溶性重组VZV gE蛋白,同时该蛋白具有较强的免疫原性,这为VZV gE亚单位疫苗的研制和大规模生产奠定了基础.

作者魏明童 ^[1] 夏兵兵 ^[2] 何志远 ^[2] 周炜 ^[2] 刘兴东 ^[3] 赵俊 ^[4] 陈敬贤 ^[5] 王明丽 ^[4] 学术成果认领

作者单位安徽医科大学第一临床医学院,安徽合肥230060 ^[1] 芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司,芜湖241000 ^[2] 安徽医科大学第二临床医学院,合肥230060 ^[3] 芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司,芜湖241000;安徽医科大学临床病毒学研究所,合肥230032 ^[4] 安徽医科大学临床病毒学研究所,合肥230032 ^[5]

关键词水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E 原核表达多克隆抗体免疫评价

分类号 R373.1+2

栏目名称

论著

DOI 10.3969/j.issn.1673-6184.2020.06.006

发布时间 2021-06-03

基金项目

安徽省高等学校省级质量工程项目（2012sjjd014）