换一批
换一批摘要为探讨伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白SopE对其入侵巨噬细胞后形成的晚期沙门菌液泡(Salmonella-containing vacuole,SCV)稳定性的影响,以伤寒沙门菌GIFU10007野生株(wild type,WT)为研究对象,利用自杀质粒pGMB151介导的同源重组法构建sopE突变株(ΔsopE);以pBAD33为载体,利用质粒回补法构建ΔsopE回补株(C-ΔsopE);利用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)原核表达质粒pET28-sfGFP构建GFP表达菌株WT/pBAD33∷pET28-sfGFP、ΔsopE/pBAD33∷pET28-sfGFP和C-ΔsopE/pET28-sfGFP.通过巨噬细胞THP-1胞内生存能力实验,研究SopE对伤寒沙门菌在巨噬细胞内生存能力的影响;利用免疫荧光和实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR),探究SopE对晚期SCV稳定性的影响;进一步采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹法探究SopE与自噬的关系.结果显示,ΔsopE/pBAD33∷pET28-sfGFP菌株在巨噬细胞内的生存能力显著低于WT/pBAD33∷pET28-sfGFP和C-ΔSopE/pET28-sfGFP菌株,sopE缺失导致晚期SCV的稳定性降低,且SopE能够抑制自噬相关基因的转录和表达.以上结果提示,SopE可能通过影响自噬而调节晚期SCV的稳定性.
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