换一批miR-132靶向调控PTEN基因对雨蛙素诱导的急性胰腺炎模型胰腺腺泡细胞增殖及凋亡的影响
Effect of miR-132 targeting PTEN gene on proliferation and apoptosis of acute pancreatic acinar cells in a model of cerulein-induced acute pancreatitis
摘要目的 探究miR-132靶向调控磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)基因对雨蛙素诱导的急性胰腺炎(AP)模型胰腺腺泡细胞增殖、凋亡的影响.方法 体外诱导并培养AP?MZ-M0321细胞,采用ELISA法检测空白对照组和雨蛙素组(经雨蛙素处理)细胞的IL-6、TNF-α表达水平.取经雨蛙素处理的细胞随机分为无义序列组(转染miR-132-mimics-NC序列)、miR-132过表达组(转染miR-132-mimics序列)和共转染组(转染质粒载体pcDNA-PTEN+miR-132-mimics序列).采用实时荧光定量PCR法检测各转染组miR-132、PTEN mRNA的表达水平.采用MTT法、AnnexinV-FITC/PI双染法检测各组细胞的增殖、凋亡情况.采用蛋白质印迹法检测各转染组中PTEN、增殖和凋亡相关蛋白的表达水平.应用TargetScan数据库预测miR-132与PTEN的靶向关系,并采用双荧光素酶报告基因实验验证.结果 AP细胞模型构建成功.经成功转染细胞后,与无义序列组比较,miR-132过表达组细胞的增殖抑制率、凋亡率、PTEN、Bax蛋白表达水平降低,Ki-67、Bcl-2蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与miR-132过表达组比较,共转染组细胞的增殖抑制率、凋亡率、PTEN、Bax蛋白表达水平升高,Ki-67、Bcl-2蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P均<0.05).TargetScan数据库预测结果显示,PTEN是miR-132的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验结果证实两者存在靶向关系.结论 miR-132过表达可靶向下调PTEN表达,促进雨蛙素诱导的AP?MZ-M0321细胞增殖并抑制细胞凋亡.
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