健脾通络方通过Wnt/β-catenin信号通路调控结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的机制研究

Mechanism research of Jianpitongluo Recipe regulating proliferation,apoptosis,and migration of colorectal cancer cells through Wnt/β-catenin signaling pathway

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摘要目的探究健脾通络方(JPTLR)通过Wnt/β-catenin信号通路调控结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡和迁移的机制.方法分别给予人CRC细胞HCT116 不同质量浓度的JPTLR(0、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、200.00 mg/mL)、5-氟尿嘧啶(5-FU)及两者联合进行干预,采用CCK-8 法、Annexin Ⅴ-FITC和碘化丙啶(PI)双染色法、细胞划痕实验检测各组细胞的增殖、凋亡和迁移能力.采用实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测JPTLR对Wnt/β-catenin信号通路及凋亡相关因子表达的影响.结果 JPTLR具有抑制HCT116 细胞增殖的作用,且这一作用具有时间及浓度依赖性.与空白对照组相比,JPTLR组的细胞凋亡率均显著升高,细胞划痕愈合率均显著降低,细胞中Wnt3a、β-catenin和Bcl-2 的mRNA及蛋白表达水平均显著降低,而Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA及蛋白表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.01);JPTLR+5-FU组的细胞凋亡率最高,细胞划痕愈合率最低,细胞中Wnt3a、β-catenin和Bcl-2 的mRNA及蛋白表达水平最低,而Bax、Caspase-3 的mRNA及蛋白表达水平最高.结论 JPTLR能够通过下调 Wnt/β-catenin 信号通路表达减弱CRC细胞的增殖、迁移和抗凋亡能力.本研究从促进肿瘤细胞凋亡的角度阐明了JPTLR的抗肿瘤作用机制,为JPTLR的临床应用转化提供了实验依据.