长链非编码RNA SOX2OT对食管癌细胞上皮-间充质转化及干细胞特性的影响
Effect of lncRNA SOX2OT on epithelial-mesenchymal transition and stem cell characteristics in esophageal cancer cells
摘要目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)SRY相关高迁移率族盒蛋白 2(SOX2)重叠转录本(OT)对食管癌细胞上皮-间充质转化(EMT)及干细胞特性的影响.方法 采用实时荧光定量PCR法检测正常人食管上皮细胞(HET-1A)及食管癌细胞系(KYSE30、KYSE70 和KYSE270)中lncRNA SOX2OT和miR-200b表达水平,并选择其中lncRNA SOX2OT表达水平最高的食管癌细胞系(KYSE30)进行后续实验.取处于对数生长期的KYSE30 细胞,随机分为空白对照组、阴性对照(NC)-小干扰RNA(siRNA)组和SOX2OT-siRNA组,比较各组细胞中lncRNA SOX2OT、miR-200b、SOX2、EMT标志物、干细胞特性相关蛋白表达水平及干细胞成球能力.采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SOX2OT、miR-200b及SOX2 的靶向调控关系.结果 与HET-1A细胞相比,KYSE30、KYSE70、KYSE270 细胞中lncRNA SOX2OT表达水平均显著升高(P均<0.05),且KYSE30 细胞中lncRNA SOX2OT表达水平最高.与空白对照组和NC-siRNA组相比,SOX2OT-siRNA组细胞中lncRNA SOX2OT、SOX2、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、ATP结合盒亚家族G成员 2(ABCG2)、醛脱氢酶 1 家族成员A1(ALDH1A1)、八聚体结合转录因子 4(OCT4)表达水平均显著降低,而miR-200b、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平均显著升高,且细胞球形成效率显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05).双荧光素酶报告基因实验检测结果显示,与SOX2OT/SOX2 野生型+miR-200b NC组相比,SOX2OT/SOX2 野生型+miR-200b mimic组细胞的荧光素酶活性显著减弱(P<0.05);SOX2OT/SOX2 突 变 型+miR-200b NC组 与SOX2OT/SOX2 突 变 型+miR-200b mimic组细胞的荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05).结论 食管癌细胞系中lncRNA SOX2OT表达水平显著升高,下调其表达可抑制食管癌细胞EMT,并减弱食管癌细胞的干细胞特性,其机制可能与miR-200b/SOX2轴有关.
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