换一批转录因子Smad2高表达载体的构建和鉴定
Construction and Identification of the overexpression vector of transcription factor Smad 2
摘要目的 构建并鉴定大鼠转录因子Smad2的高表达载体(简称pLJM1-Smad2).方法 首先以E3大鼠肝脏cD-NA为模板、PCR法获取转录因子Smad2 mRNA CDS区(即目的基因片段);然后用AgeⅠ、EcoRⅠ双酶切pLJM1-MGFP载体和目的基因片段,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;之后再将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,扩大培养并提取重组质粒;最后用PCR、AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切以及DNA测序鉴定重组质粒.结果 PCR、AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切结果均提示pLJM1-Smad2重组载体中插入了目的片段Smad2;将含有目的片段的阳性重组体克隆送上海生工进行DNA测序,并将测序结果与NCBI数据库的进行比对,确定插入片段无突变、序列完全正确,证实pLJM1-Smad2重组载体中成功插入了目的基因片段Smad2.结论 成功构建了转录因子Smad2的高表达载体pLJM1-Smad2.
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关键词
转录因子Smad2高表达载体目的片段重组载体transcription factor smad2overexpression vectorpurpose fragmentrecombinant vector
分类号
R575.5（消化系及腹部疾病）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1001-8883.2015.04.010
发布时间
2016-01-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金资助项目（(81370952,8137013)）
陕西省科技计资助划项目（(2013K21-22-03)）
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