换一批
换一批人白介素24融合载体的构建、突变纠正和表达优化
Prokaryotic Expression Optimization, Point Mutation Correction and Cloning of Human Interleukin-24
摘要以武汉大学病毒学国家重点实验室保存的白介素24 (IL-24)为模板,构建原核表达载体pET28a-IL-24,转化大肠杆菌DH5α,挑取单克隆,测序结果显示:在IL-24第18位A→G,21位C→T,412位G→A,18位和21位的突变没有使该位上的氨基酸发生改变,而412位的突变导致了该位点上的氨基酸发生改变——由丙氨酸A变为苏氨酸T.通过设计突变引物,二次PCR将其纠正,转化大肠杆菌BL21.通过改变诱导剂IPTG的浓度、诱导时间和诱导温度摸索最佳诱导条件,SDS-PAGE、Western blot检测显示有融合蛋白6his-IL-24表达.结果表明:通过二次PCR成功构建了IL-24原核表达载体,表达产物主要以包涵体的形式存在,最佳诱导温度为28℃,最佳诱导剂浓度为1 mmol/L,最佳诱导时间是8h.
更多相关知识
关键词
大肠杆菌人白介素24原核表达二次PCR融合蛋白Escherichia coliinterleukin-24 (IL-24)prokaryotic expressiontwo-step PCRfusion protein
分类号
Q51
DOI
10.16088/j.issn.1001-6600.2016.01.024
发布时间
2016-06-28
基金项目
“桂科重”研究项目（14121003-3-1）
- 浏览0
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
